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Videodrop用于病毒样本滴度及直径测定评估

来源:www.blmscc.cn 发布时间:2021年09月01日

病毒粒子浓度对于大多数涉及病毒的研究至关重要,特别在于以病毒载体的基因治疗、疫苗等相关行业中。目前已有一些相应方法可对病毒浓度进行测定如酶联免疫检测 (ELISA)、高性能液相色谱 (HPLC)、传输电子显微镜 (TEM)、原子力显微镜 (AFM)等。但上述方法用时相对较长且样本处理过程复杂。法国Myriade公司在Bocara等人研究基础上开发了videodrop干涉光显微镜,可以无标记、无需纯化、无破坏及快速地对病毒及其他生物样本进行检测。

今天与大家分享一篇芬兰库奥皮奥大学基因与治疗中心最新发布于Viruses上一篇关于videodrop干涉显微镜在病毒滴度及表征方面的实验评估。实验对LV、BV及Ad病毒进行了滴度、粒径等相关参数测定,同时也与传统测定方法进行了比较,其测定结果证明videodrop是快速分析病毒粒子样本的合适选择,特别是在测量高浓度纯化病毒制剂时。

实验采用LV、BV及Ad病毒为样本测试Videodrop系统测定的精度、重复性、直径、病毒粒子灭活及聚度等相关数据,同时也以LV为例与传统滴定方法进行了比对,其测定结果如下。

1. LV稀释曲线及中间精密度测定

      实验在不同的时间(图a)进行了两次独立的稀释系列准备和测量。对于单次稀释重复性,两个操作员在一天内重复进行了 8× 稀释制剂和测量(图b),由于在仪器测试时对样本高度及样品台变化,两个操作员测定略有差异,单个样本日内三次重复测定可在CV14%以内。


同时,5个月来两个操作员反复对LV进行了检测(图c),收集了中间精度结果。videodrop平均物理浓度测定值为2.01×1010 pp/mL(CV% =19.4),其中2C中的29周时间点后存在明显偏离可能与样品出现聚合相关。

2. LV测定与传统测定方法相关性

采用Videodrop系统对不同转基因型的各种LV样本进一步进行分析。样本包括从细胞培养到悬浮反应器运行中采集的上下游材料。根据p24 ELISA vp/mL(图d)、qPCR TU/mL(图e)和病毒基因组RT-ddPCR vg/mL(图f)的滴定结果与Videodrop滴定结果相对比,其与所有三种内部滴定方法都具有很强的相关性,特别是p24法,相关性可达到0.986。

4. BV及Ad测试

      实验在此也采用Videodrop对BV 和Ad样本进行了测试,亦可以观测到其强相关性。

5. Videodrop系统检测病毒破损或聚合

      使用 Ad 和 LV 进行病毒破坏和聚合测试:分别采用高温及Triton X-100 对病毒灭活。同时使用硫酸铵对Ad进行聚合测试。从下图可知,高温及Triton X-100处理后其粒子浓度随时间急剧下降,同时加入硫酸铵后粒子直径也开始增加。分析病毒聚集程度的能力是病毒载体研究与开发的重要因素,Videodrop可为该过程提供其可视化结果。

6. 强度和直径数据

    由于Ad通常是通过对细胞进行解离来收获的,因此使用Videodrop来研究腺病毒与细胞裂解液混合物的直径和强度值。经Videodrop测定得到的Ad 峰值直径与文献值非常一致(CV% = 7.71)。

 综合上述测定结果可以得出结论,Videodrop设备是分析多种不同类型的LV病毒制剂, BV 制剂以及Ad病毒制剂的颗粒浓度的适用工具。特别是其样本的测定结果时间可以在短时间内获得,其每个样品的测定价格也非常低,无一次性消耗品。